Описание исследования

T-SPOT – непрямой метод диагностики туберкулеза, проводимый in vitro (дословно «в стекле» – т. е. вне организма). Исследование основывается на выявлении эффекторных Т-клеток посредством их стимуляции антигенами Mycobacterium tuberculosis.

Mycobacterium tuberculosis (микобактерия туберкулеза, МБТ, палочка Коха) является возбудителем туберкулеза – хронического инфекционного заболевания, способного поражать все органы и системы организма. Туберкулез (в переводе с латыни «бугорок») является распространенным заболеванием, поражающим не только людей, но и животных, которые наряду с людьми могут быть переносчиками инфекции. Степень ее распространения зависит от многих факторов, в числе которых не последнее место занимают социальные условия. По данным статистики, каждый год количество заболевших увеличивается на 9 млн. человек и около 2 млн. ежегодно умирают от инфекции. Согласно оценке Всемирной организации здоровья число латентных носителей инфекции составляет почти треть населения планеты.

Палочку, являющуюся возбудителем туберкулеза, открыл в конце 19 века немецкий микробиолог Роберт Кох. На сегодняшний день известно порядка 150 видов и микобактерий (Мycobacterium), из которых опасность для людей представляет М. tuberculosis (более 90 % всех случаев туберкулезной инфицирования), М. bovis (5 %случаев) и М. africanum (около 3 %случаев – главным образом среди населения стран тропической Африки). Это аэробные бактерии (т. е. нуждающиеся для жизнедеятельности в кислороде), устойчивые к кислоте, воздействию многих факторов внешней среды, они обнаруживаются в почве, воде. Вот некоторые характеристики микобактерии туберкулеза:

• погибает при нагревании выше +90°С;
• выдерживает замораживание до –260°С;
• до полугода сохраняет жизнеспособность в почве;
• не гибнет на предметах обихода больного в течение трех и более месяцев;
• не гибнет при применении стандартных концентраций дезинфицирующих средств;
• сохраняет жизнеспособность в высохшей мокроте в течение 10 месяцев;
• выживает в воде более 12 месяцев;
• проявляет поразительную устойчивость к антибиотикам (некоторые виды микобактерий не реагируют ни на один известный и применявшийся ранее антибиотик).

Инфицирование бактерией может происходить одним из путей:

• наиболее часто – воздушно-капельным, при вдыхании воздуха с частицами мокроты и слизи;
• воздушно-пылевым – при повторном попадании в воздух с пылью высохшей мокроты;
• алиментарным – при употреблении зараженных продуктов питания (чаще всего молока и мяса больных животных);
• контактным – при пользовании предметами личной гигиены и обихода больного человека;
• внутриутробным, от больной матери к ребенку (редко).

После инфицирования микобактерией туберкулеза может наблюдаться одна из следующих ситуаций:

• агент инфекции полностью удаляется из организма;
• происходит развитие первичного туберкулеза (в случае стремительного размножения бактерий);
• инфекция приобретает латентную форму (латентная туберкулезная инфекция (ЛТИ) – состояние, при котором возбудитель туберкулеза присутствует в организме человека, обусловливая положительные реакции на иммунологические тесты, в том числе на туберкулезные аллергены, при отсутствии в то же время клинических и рентгенологических признаков заболевания туберкулезом).

Туберкулез – очень коварная болезнь. Она может долго никак не проявляться и обнаружиться случайно, хотя косвенно дает о себе знать слабостью, быстро наступающей усталостью, субфебрильной температурой (37,1-38⁰С), ночной потливостью, а при исследовании крови – анемией (малокровием – уменьшением ниже пороговых значений количества кровяных клеток, переносящих кислород) и лейкопенией (снижением концентрации лейкоцитов в единице объема крови). В результате исследований установлено, что у 5% носителей туберкулезной палочки болезнь развивается в течение первого года, еще у 5% инфекция переходит в активную фазу в течение жизни. Таким образом, общее количество инфицированных микобактерией туберкулеза людей, которые составляют группу пожизненного риска, составляет 10%.

Вероятность развития инфекции может повышаться при наличии определенных дополнительных условий. Так, например, среди ВИЧ-инфицированных лиц с латентной формой туберкулезной инфекции (ЛТИ) вероятность ежегодного развития туберкулеза составляет 10%, пожизненного – 50%.

На сегодняшний день, несмотря на серьезный прорыв в области противомикробной терапии, туберкулез все также имеет угрожающе широкое распространение. Поэтому очень важно выявлять бессимптомную инфекцию как можно раньше.

Диагностика туберкулеза проводится комплексно. Согласно действующему законодательству, обязательными являются:

• внутрикожные аллергические пробы – реакция Манту и «Диаскинтест»;
• инструментальное обследование – флюорография и рентген;
• лабораторные тесты, предназначенные для выявления агента инфекции (например, ПЦР-тесты), его идентификации, определение чувствительности микобактерий туберкулеза к антибактериальным средствам, степени выраженности реакции иммунной системы на патогенный микроорганизм.

T-SPOT является современным и высокоэффективным методом определения наличия специфической реакции на микобактерии туберкулеза, особенно если клинически признаки болезни минимальны или отсутствуют, если получены сомнительные результаты при проведении наиболее часто применяемых исследований. Согласно рекомендациям Минздрава РФ, с 2017 года T-SPOT применяется для обязательного ежегодного скринигового обследования детей в возрасте от 1 до 17 лет, проводимого перед поступлением в детские учреждения и школы. Тест можно применять для обследования детей, которым была введена вакцина БЦЖ (вакцина, приготовленная из штамма ослабленной живой бычьей туберкулёзной палочки, которая была выращена в искусственных условиях и практически утратила способность вызывать заболевание). Отрицательный результат исследования при отсутствии клинических симптомов туберкулеза (в т. ч. интоксикации и респираторного синдрома) дает право врачу дать заключение об отсутствии у ребенка туберкулеза.

Суть данного метода заключается в выявлении в крови эффекторных Т-клеток (CD4 и CD8). Данные клетки под воздействием белков ESAT-6 и CFP10 продуцируют гамма-интерферон. Применяемые для тестирования антигены являются компонентами микобактерий, вызывающих развитие туберкулеза (М. tuberculosis, М. bovis, М. africanum), и отсутствуют в бактериях, применяемых для производства вакцины БЦЖ и у безопасных для человека вида Мycobacterium.

Тест T-SPOT обладает следующими преимуществами:

• возможностью проведения массовых обследований;
• достаточно высокой специфичностью и чувствительностью (87-97%);
• безопасностью и отсутствием побочных эффектов, т. к. проводится вне организма;
• отсутствием ложноположительных реакций, связанных с проводимой ранее прививкой БЦЖ, и перекрестных реакций с нетуберкулезными микобактериями, обитающими в окружающей среде (исключение составляют M. kansasii, M. szulgai и M. marinum);
• отсутствием противопоказаний и ограничений по времени проведения;
• возможностью диагностики внелегочных форм туберкулеза;
• возможностью диагностики заболевания у лиц с ВИЧ-инфекцией, кровь которых характеризуется низким содержанием CD4-клеток;
• возможностью диагностировать инфекцию уже через 3 недели после заражения.

Данный тест не предназначен для дифференцированного диагностирования латентной инфекции и активной формы болезни. Кроме того, он не является на 100% специфичным. В связи с этим рекомендуется применять T-SPOT.TB в комплексе со стандартными методами обследования, учитывая при этом вероятность инфицирования индивидуально в каждом отдельном случае.

Подготовка к исследованию

Кровь на анализ рекомендуется сдавать утром натощак или не ранее, чем через 4-6 часов после приема пищи. Воду (негазированную, не минеральную) можно пить в обычном режиме. От употребления чая, кофе, соков, напитков за 2 часа до отбора пробы желательно воздержаться.

Общие рекомендации:

• перед проведением обследования необходимо исключить психоэмоциональные и физические нагрузки (в том числе посещение плавательных бассейнов, спортивных залов, сауны и т.п.);
• за сутки до забора крови запрещено употребление алкогольных напитков (в т. ч. пива);
• за час до исследования запрещается курение;
• перед сдачей крови необходимо проконсультироваться у лечащего врача о возможном влиянии на результат проводимого исследования принимаемых лекарственных средств;
• непосредственно в день сдачи крови строго по согласованию с лечащим врачом прекратить прием тех медицинских препаратов, которые могут исказить результат, а в случае невозможности отмены – предупредить об этом работников лаборатории;
• непосредственно перед отбором пробы желательно провести в спокойствии 10-15 минут.

Обратите внимание! Не рекомендуется проводить тестирование после инструментального, мануального, гастрологического, рентгеновского, ультразвукового, ректального обследований, флюорографии, электрокардиограммы, кольпоскопии, массажа, физиотерапевтических процедур, других диагностических или лечебных манипуляций.

Важно! При проведении исследований в динамике сдачу крови рекомендуется осуществлять в одной и той же лаборатории, в одно и то же время суток, максимально соблюдая условия подготовки к тестированию (режим питания, физических нагрузок и т.д.).

Что еще необходимо знать пациентам

Проба Манту не влияет на результат теста T-SPOT, поэтому его можно проводить независимо от постановки пробы.

После Диаскин-теста, T-SPOT можно проводить не ранее, чем через 2 месяца.

Во время ОРЗ может отмечаться неспецифическая реакция, которая мешает оценке результата. Поэтому предпочтительно делать тест T-SPOT не ранее, чем через 1 месяц после выздоровления.

Показания к исследованию

Тестирование предназначено для диагностики туберкулеза и проводится:

a) в качестве первичного обследования детей как альтернатива кожным пробам (Манту, Диаскин);

b) для обследования детей, привитых БЦЖ, с ложноположительной реакцией Манту (до проведения флюорографии или рентгена);

c) как дополнительное исследование в составе комплексных диагностических мероприятий наряду с другими лабораторными тестами и инструментальными исследованиями;

d) для обследования лиц, входящих в группу повышенного риска заражения:

• пациентов, в лечении которых систематически применяются глюкокортикоиды или препараты, угнетающие работу иммунной системы;
• пациентов, страдающих аутоиммунными и прочими заболеваниями, вызывающими снижение системного иммунитета;
• онкологических больных получающих лучевую или химиотерапию;
• пациентов с ВИЧ инфекцией, особенно тех, у которых определено снижение количества CD-4 клеток;
• пациентов, которым была произведена пересадка донорских органов;
• беременных женщин;
• медицинских работников;
• лиц, много путешествующих;
• военнослужащих;
• лиц, прибывших из регионов с широким распространением туберкулеза (Азии, Африки);
• пациентов, у которых были получены сомнительные или положительные результаты кожных проб;
• лиц, контактировавших с больными туберкулезом;
• лиц, освободившихся из мест заключения;

e) для обследования лиц, которым вследствие аллергических реакций или наличия кожных заболеваний противопоказано проведение кожных тестов на туберкулез;

f) для лиц, подготавливающихся к переливанию крови или пересадке органов;

j) для обследования лиц, у которых подозреваются внелегочные формы туберкулеза;

h) для обследования лиц с эпилепсией, хроническими заболеваниями в стадии обострения, которым проведение кожных тестов затруднено.

Интерпретация исследования

Общий результат теста выдается в качественной формулировке: «отрицательно», «серая зона», «положительно». Также указывается количество специфически сенсибилизированных к M. tuberculosis эффекторных Т-клеток отдельно по каждому антигену (A (ESAT-6), B (CFP10)). Результат исследования дополняется заключением, в котором дается предварительная интерпретация полученных показателей. Для получения точного диагноза необходимо проведение комплекса дополнительных исследований, трактовка которых осуществляется специалистом с учетом анамнеза (медицинской истории пациента) и наличия/отсутствия клинических признаков туберкулеза.

Референсные значения:

M.tuberculosis – отрицательно.

A (ESAT-6):

• отрицательно – 0-4;
• серая зона – 5-7;
• положительно – 8 и выше.

B (CFP10)

• отрицательно – 0-4;
• серая зона – 5-7;
• положительно – 8 и выше.

Положительный результат является показателем наличия специфически сенсибилизированных (чувствительных) эффекторных клеток к микобактерии туберкулеза.

Данный показатель отражает только наличие в организме возбудителя туберкулеза, но не позволяет отличить активную инфекцию от латентной формы. Для дифференциальной диагностики необходимо проведение других лабораторных исследований: ПЦР-тестов (определение в исследуемом образце биоматериала наличия специфических фрагментов ДНК возбудителя инфекции), микробиологического исследования мокроты, а также инструментального исследования (в частности, рентгенографии грудной клетки).

У лиц, инфицированных M. kansasii, M. szulgai, M. gordonae или M. marinum может быть получен ложноположительный результат. При подозрении на наличие у пациента перечисленных инфекций рекомендуется проведение альтернативных тестов диагностики туберкулеза.

Отрицательный результат подразумевает отсутствие в образце специфически сенсибилизированных (чувствительных) эффекторных клеток к M. tuberculosis в значимой концентрации. Он не исключает бессимптомного носительства палочки Коха или текущей инфекции. Если отрицательный результат был получен лицом, контактировавшим с туберкулезным больным, или имеющим симптомы возможной инфекции, то исследование необходимо повторить через 6 недель.

Сомнительный результат является пограничным, т. н. «серой зоной». Для уточнения состояния пациента при получении сомнительного результата рекомендуется пройти повторное обследование через 30-60 дней. Если при вторичном тестировании результат будет опять сомнительный, то для диагностики необходимо использовать альтернативные методы обследования, а также данные истории болезни обследуемого лица.

Результат теста выдается на бланке лаборатории медицинской компании «Наука». Пример по данному анализу представлен ниже:

Ф.И.О.: Иванов Сидор Петрович  Пол: м     Дата рождения: хх.хх.хххх

Дата исследования: хх.хх.хххх

Литература:

1. Приказ МЗ РФ России от 21.03.2003 года N 109 "О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации".

2. Руководство по ведению пациентов с латентной туберкулезной инфекцией. ВОЗ. Женева. 2015. 40 с.

3. Латентная туберкулезная инфекция (ЛТИ) у детей. Клинические рекомендации. Министерство здравоохранения Российской Федерации, Российское общество фтизиатров. – М. 2016.

4. Выявление и диагностика туберкулеза у детей, поступающих и обучающихся в образовательных организациях. Клинические рекомендации. МЗРФ, Российское общество фтизиатров. - М. 2017.

5. Туберкулез органов дыхания у взрослых. Клинические рекомендации. Министерство здравоохранения Российской Федерации, Российское общество фтизиатров. – М. 2018.

6. Updated Guidelines for Using Interferon Gamma Release Assays to Detect Mycobacterium tuberculosis Infection – United States, 2010. MMWR Recommendations and Reports. 2010; 59(RR-5):49-55.

7. Mazurek GH, Jereb J, Vernon A, LoBue P, Goldberg S, Castro K; IGRA Expert Committee; Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Updated guidelines for using Interferon Gamma Release Assays to detect Mycobacterium tuberculosis infection - United States, 2010. MMWR Recomm Rep. 2010 Jun 25; 59(RR-5):1-25.

8. European Centre for Disease Prevention and Control. Use of interferon-gamma release assaysin support of TB diagnosis. Stockholm: ECDC. 2011.

9. Diel R, Goletti D, Ferrara G, Bothamley G, Cirillo D, Kampmann B, Lange C, Losi M, Markova R, Migliori GB, Nienhaus A, Ruhwald M, Wagner D, Zellweger JP, Huitric E, Sandgren A, Manissero D. Interferon-γ release assays for the diagnosis of latent Mycobacterium tuberculosis infection: a systematic review and meta-analysis. Eur Respir J. 2011 Jan; 37(1): 88-99.

10. Anochie PI, Onyeneke EC, Ogu AC, Onyeozirila AC, Aluru S, Onyejepu N, Zhang J, Efere L, Adetunji MA, Sánchez JG. Recent advances in the diagnosis of Mycobacterium tuberculosis. Germs. 2012 Sep 1; 2(3):110-120. Review.

11. Gengenbacher Martin, Kaufmann Stefan H.E. Mycobacterium tuberculosis: Success through dormancy. FEMS Microbiol Rev. 2012 May; 36(3): 514–532.

12. Lewinsohn David M. et al. Official American Thoracic Society/Infectious Diseases Society of America/Centers for Disease Control and Prevention clinical practice guidelines: Diagnosis of tuberculosis in adults and children. Clin Infect Dis 2016 Dec 8.

13. Official American Thoracic Society/Infectious Diseases Society of America/Centers for Disease Control and Prevention Clinical Practice Guidelines: Diagnosis of Tuberculosis in Adults and Children David M. Lewinsohn, Michael K. Leonard, Philip A. LoBue et al. Clin Infect Dis (2017) 64 (2): 111-115.