Описание исследования

Коронавирус SARS-CoV-2 (Severea cutere spiratory syndrome-related coronavirus 2) – это входящий в семейство Coronaviridae сферический РНК-содержащий вирус с диаметром порядка 80-160 нм. SARS-CoV-2 является возбудителем синдрома COVID-19 –острого респираторного заболевания с потенциально тяжелым течением, впервые обнаруженного в Китае в 2019 году.

Инфицированный человек выделяет вирус в окружающую среду с первых дней болезни и продолжается в среднем в течение 20 дней (в отдельных случаях – больше месяца). Наиболее распространенным является воздушно-капельный путь инфицирования. Передача заболевания в этом случае происходит при чихании, кашле, разговоре на расстоянии менее 1,5 метров.

Инкубационный период коронавирусной инфекции длится от 2 до 14 дней, но чаще всего она проявляется на 5-7 день от момента заражения. Болезнь может протекать:

• в бессимптомной форме (по разным данным от 20 до 50% случаев);
• в стертой или легкой форме;
• в тяжелой форме.

Инфекционный процесс начинается при внедрении вируса в наружные (эпителиальные) клетки слизистых оболочек верхних дыхательных путей. Там происходит активный процесс его размножения путем многократного увеличения количества копий вирионов – полноценных вирусных частиц. Выходя из зараженных клеток, новые частицы распространяются по здоровым клеткам, и процесс продолжается, распространяясь из верхних в нижние дыхательные пути, опускаясь в клетки легочных пузырьков – альвеол. Поражение вирусом клеток легких обусловливает развитие острого респираторного синдрома – вирусной пневмонии. При стремительном развитии, вирусная пневмония быстро приводит к дыхательной недостаточности (патологическому состоянию, характеризуемому нарушением нормального газового состава крови, которое не компенсируется силами организма или компенсируется за счёт повышения интенсивности работы аппарата внешнего дыхания и сердца, что может, в свою очередь, вызвать снижение функциональности организма в целом).

Способность провоцировать развитие заболевания (патогенность) и вызывать ответ иммунной системы (иммуногенность) SARS-CoV-2 обусловлена входящими в его состав антигенами. Коронавирус состоит:

a) из нуклеиновой кислоты, связанной с нуклеокапсидным белком (N-протеином);

b) из белковой оболочки (капсида), которая содержит белки-антигены:

• S-гликопротеин (он также называется спайковый белок, S-белок, spikeglycoprotein, шип);
• Е-белок (малый белок оболочки Е);
• М-белок (матричный белок М);
• НЕ (белок гемагглютинит-эстераза).

Гено́м вируса (биологическая информация, необходимая для его построения и поддержания жизнеспособности) представляет собой однониточную РНК, кодирующую 4 основных структурных белка вируса: N (нуклеокапсидный) белок, S (спайковый) белок, М (мембранный) белок и Е-белок. Основными иммуногенными белками являются S-белок и N-белок.

Вирусные частицы могут проникать в клетки, на поверхности которых присутствует рецептор – мембранный белок ангиотензинпревращающий фермент II типа (АПФ2). Его содержат оболочки клеток центральной нервной системы, дыхательных органов, сердца, почек, пищевода, мочевого пузыря, подвздошной кишки. Наибольшее количество рецепторов АПФ2 – в реснитчатом эпителии дыхательных путей и альвеолах легких. Главную роль в фиксации и проникновении вируса в средину клетки играет S-белок. Его составляют две субъединицы – S1 и S2. Субъединица S1 содержит RBD-домен (область шипа S-белка), который связывается с вышеназванным рецептором клетки, атакуемой вирусом. Субъединица S2 способствует слиянию вируса с клеточной мембраной и проникновению его в средину чувствительных клеток, где начинается активный процесс его многократного копирования (репликации).

S-белок образует на поверхности вируса шипы, что делает его похожим на корону (отсюда и название «коронавирус»). Внутренняя часть шипов напоминает свернутые ленты, вдоль которых расположены аминокислоты. Складки и изломы «лент» не позволяют иммунной системе взаимодействовать с их внутренней частью – взаимодействие идет только с некоторыми внешними пептидами (последовательностями аминокислот). Реакцией на контакт с белками вируса является продукция антител (иммуноглобулинов, Ig) – молекул, предназначенных для борьбы с чужеродными веществами. Их подразделяют на классы – A, M, G, E, D. Данный тест предназначен для определения наличия специфических антител класса IgG "SARS-CoV-2, IgG ВЕКТОР", которые вырабатываются после введения пептидной вакцины «ЭпиВакКорона».

Принцип действия пептидных вакцин кардинально отличается от других видов прививок. Иммунитет при применении «ЭпиВакКороны» формируется особым образом. Отличие состоит в том, что пептидная вакцина способствует продукции антител только к функционально значимым в жизненном цикле вируса участкам спайкового белка, в то время как другие вакцины активируют выработку гораздо большего разнообразия иммуноглобулинов, создавая дополнительную нагрузку на иммунную систему. Кроме того, пептидные вакцины практически не вызывают побочных эффектов, что служит дополнительным аргументом в их применении.

Для проведения анализа используется набор реагентов «SARS-CoV-2, IgG ВЕКТОР», отличающийся от большинства коммерческих тест-систем высокой чувствительностью, что позволяет выявить небольшой пул ключевых антител к определенным участкам белка SARS-CoV-2. Основной составляющей является синтетический антиген из смеси рекомбинантных белков коронавируса – N (нуклеокапсидного) и S (спайкового), аналогичный оригинальному антигену SARS-CoV-2.

Исследуемая проба предварительно разводится входящими в состав тест-системы растворами для разведения сывороток. На первом этапе в разведенной сыворотке происходит реакция антител (при их наличии) с сорбированным антигеном коронавируса.

На втором этапе происходит выявление образовавшихся комплексов «антиген-антитело» посредством иммуноферментного конъюгата (молекулы, через которую связываются вместе две другие различные молекулы) анти-IgG человека. Для визуализации результата добавляется ТМБ-субстрат, окрашивающий раствор с интенсивностью, пропорциональной количеству комплексов «антиген-антитело-конъюгат». Учет результата осуществляется добавлением стоп-реагента.

Согласно информации, предоставленной Государственным научным центром вирусологии и биотехнологии «Вектор» – производителем вакцины «ЭпиВакКорона»:

• диагностическая чувствительность реагентов составляет 98,5-100% при доверительной вероятности 95%;
• диагностическая специфичность составляет 98,5-100% при доверительной вероятности 95%.

Кроме того, было протестировано воздействие на результат клинического исследования интерферирующих веществ, которое показало отсутствие влияния:

• гемоглобина в концентрации до 1000мг/дл;
• билирубина в концентрации до 15 мг/дл;
• триглицеридов в концентрации до 700 мг/дл.

Рекомендуется следующая схема проведения вакцинации и исследования иммунитета:

• нулевой день – первое введение пептидной вакцины «ЭпиВакКорона»;
• 14-21 день – повторная вакцинация;
• 42 день – определение уровня антител и оценка иммунитета.

По результатам проведенных испытаний с участием группы практически здоровых добровольцев 18-60-тилетнего возраста, схема двухдозовой вакцинации привела к выработке антител, специфичных к использованным в вакцине антигенам, в 100% случаев.

Показания к исследованию

Данный тест предназначен для определения наличия иммунитета после введения пептидной вакцины «ЭпиВакКорона» (Вектор).

Подготовка к исследованию

Кровь на анализ рекомендуется сдавать утром не ранее чем через 8-14 часов после вечернего приема пищи. Разрешено пить только чистую воду без газа (не минеральную), употребление чая, кофе, соков запрещено.

Общие рекомендации:

• накануне и непосредственно перед сдачей крови воздержаться от физической и морально-психологической нагрузки;
• за сутки до обследования запрещено употребление алкоголя, за час – курение;
• за 24 часа до тестирования по согласованию с лечащим врачом рекомендуется прекратить прием любых лекарственных средств;
• непосредственно перед сдачей крови желательно 10-15 минут провести в спокойствии (посидеть).

Обратите внимание! Для получения корректного результата исследования кровь на анализ не рекомендуется сдавать после внутримышечных и внутривенных инъекций, физиотерапевтических процедур, массажа, переливания крови, флюорографии, кольпоскопии, гастроскопии, биопсии, пункции, рентгеновского, мануального, инструментального, ректального, ультразвукового исследования, электрокардиограммы, других терапевтических и/или диагностических манипуляций.

Важно! Данное тестирование рекомендуется проходить не ранее, чем через 14 дней после повторного введения вакцины.

При проведении исследований в динамике сдачу крови рекомендуется осуществлять в одной и той же лаборатории, в одно и то же время суток, максимально соблюдая условия подготовки к тестированию (режим питания, физических нагрузок и т.д.)

Интерпретация исследования

Данный тест полуколичественный. Результат выдается в форме коэффициента позитивности (КП). Он равен:

КП = оптическая плотность конкретной пробы/пороговое значение

Универсальность коэффициента позитивности позволяет применять его при проведении всех иммуноферментных исследований. Данная величина отражает, насколько позитивен конкретный показатель анализа. Он дает возможность врачам более точно истолковывать полученные результаты.

Интерпретация коэффициента позитивности:

• отрицательный < 0,85;
• положительный > 1,00;
• сомнительный 0,85 - 1,0.

Положительный результат может быть получен:

• в случае получения иммунного ответа на введенную вакцину;
• при иммунном ответе организма на перенесенную коронавирусную инфекцию.

Отрицательный результат может свидетельствовать:

• об отсутствии иммунного ответа;
• о не определяемо низком уровне антител.

Ответ «сомнительно» дается в случае, если вероятность положительного или отрицательного результата не превышает 95%. Один из возможных вариантов такого состояния – очень низкая концентрация антител. Для уточнения результата рекомендуется повторно отобрать пробу через 10-14 дней.

Результат теста выдается на бланке лаборатории медицинской компании «Наука». Пример по данному анализу представлен ниже:

Ф.И.О.: Иванов Сидор Петрович  Пол: м    Дата рождения: хх.хх.хххх

Дата исследования: хх.хх.хххх   хх:хх:хх

Литература:

1. Временные методические рекомендации. Профилактика, диагностика и лечение новой коронавирусной инфекции (COVID-19). МЗ РФ. Версия 11 (07.05.2021).

2. Роспотребнадзор. О расширении доступности оценки поствакцинального иммунитета после вакцинации «ЭпиВакКорона». 08.06.2021 г.

3. Рыжиков А.Б. с соавт. Иммуногенные и протективые свойства пептидной вакцины против SARS-CoV-2. Вестник РАМН. — 2021. — Т. 76. — № 1. — С. 5–19.

4. Рыжиков А. Б. и др. Простое слепое плацебо-контролируемое рандомизированное исследование безопасности, реактогенности и иммуногенности вакцины «ЭпиВакКорона» для профилактики COVID-19 на добровольцах в возрасте 18–60 лет (фаза I–II) //Инфекция и иммунитет. – 2021. – Т. 11. – №. 2. – С. 283-296.

5. Материалы фирмы-производителя реагентов.