Описание исследования

Цель проведения люпус-теста – выявление в плазме крови антикоагулянтов волчаночного типа.

Волчаночный антикоагулянт (люпус-коагулянт) – общее название антифосфолипидных антител, ошибочно вырабатываемых иммунной системой организма к фосфолипидам и (или) соединяющимся с ними белкам. В плазме крови волчаночные антикоагулянты связываются с фосфолипопротеидными мембранами и тормозят активацию и взаимодействие между собой плазменных факторов свертывания крови. Их присутствие вызывает удлинение времени свертывания крови в фосфолипид-зависимых коагуляционных тестах. Наиболее очевидны эти нарушения при использовании в них активаторов процесса свертывания в низких концентрациях.

Волчаночный коагулянт получил свое название благодаря тому, что впервые был обнаружен у лиц с системной красной волчанкой (СКВ) – аутоиммунным заболеванием, характеризуемым поражением соединительной ткани организма и ее производных с вовлечением в патологический процесс сосудов микроциркулярного русла. Однако практика показала, что не у всех пациентов с СКВ обнаруживается люпус-антикоагулянт. В то же время он может присутствовать в организме людей, с другими аутоиммунными патологиями, хроническими инфекциями (например, ВИЧ, гепатит С) или появляться на фоне приема некоторых медицинских препаратов. Также волчаночный антикоагулянт может выявляться у незначительного количества практически здоровых людей.

На сегодняшний день считается, что группа аутоиммунных антител, обозначенная как антифосфолипидные, характеризуется взаимодействием не столько с фосфолипидами, но прежде всего с соединяющимися с ними белками (бета-2гликопротеином, протромбином, протеином С, аннексином V, тромбомодулином, кининогенами, атромбиномIII и пр.) и образовавшимися белково-фосфолипидными комплексами. Досконально не изучено, какой именно механизм, приходящий в движение под воздействием антифосфолипидных антител, вызывает развитие тромбоза, однако известно, что волчаночный антикоагулянт способен ингибировать активность таких ферментов как протеин S и фосфолипаза А-2. Результатом этого процесса является снижение синтеза клетками внутренней поверхности кровеносных сосудов (эндотелия) простациклина, что повышает угрозу тромбообразования.

Образование тромбов может происходить как в артериях, так и в венах. Наиболее распространенной патологией является тромбоз глубоких вен – образование сгустков свернувшейся крови в венах ног. Образование тромба препятствует нормальному прохождению крови по сосудам, что может повлечь за собой развитие патологий внутренних органов, а также вызвать сердечный приступ, инсульт, острую закупорку (тромбоэмболию) различных артерий.

Присутствие в плазме крови волчаночного антикоагулянта сопровождается рядом состояний, в частности:

a) рецидивирующими тромбозами вен и артерий;

b) нарушениями мозгового кровообращения, что может проявляться:

• головными болями;
• обмороками;
• динамическим (преходящим) расстройством мозгового кровообращения (острым состоянием, причиной возникновения которого являются изменение состава крови, мелкоочаговые кровоизлияния или недостаточный приток крови к нейронам);
• парезами (потерей мышечной силы на фоне поражения нервной системы);
• эпилептическим синдромом (в отличие от эпилепсии, эта патология не является хронической и при устранении причин ее возникновения может полностью исчезнуть);
• нарушением зрения и пр.;

c) фетоплацентарной недостаточностью (изменениями в плаценте, вызывающими реакцию плода на различные патологические состояния в организме матери);

d) привычным невынашиванием беременности:

• выкидышами;
• внутриутробной гибелью плода;

e) тромбоцитопенией (снижением количества тромбоцитов ниже 150⋅10^9/л, вызывающем повышенную кровоточивость и проблемы с остановкой кровотечений);

f) кровоточивостью микроциркуляторного типа;

g) полиаллергией (восприимчивостью организма к нескольким аллергенам) и другими иммунными нарушениями;

h) склонностью к развитию ДВС-синдрома (синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания — нарушением свёртываемости крови вследствие повышенного тромбообразования).

Однако действие волчаночного антикоагулянта не всегда вызывает подобную реакцию организма – его присутствие может не проявляться без добавочных причин. Как правило, патология проявляется при сочетании действия антител и дополнительных факторов, способствующих тробмообразованию, в частности:

• курения;
• применения комбинированных оральных противозачаточных средств и препаратов, содержащих эстроген;
• беременности.

Влияние волчаночного антикоагулянта при беременности может:

• спровоцировать самопроизвольное прерывание беременности;
• вызвать преждевременные роды (причиной этому является попадание тромбов в сосуды плаценты);
• нарушать развитие ткани плаценты;
• оказывать влияние на внутриутробное развитие и рост ребенка.

Негативному воздействию антител с высоким риском развития патологии наиболее подвержены:

• женщины;
• курильщики;
• лица, принимающие гормональные препараты;
• лица, отягченные семейной наследственностью по тромбозам;
• лица с ливедо (патологией, характеризуемой образованием на коже сетчатого рисунка красновато-голубого или пурпурного цвета, появляющегося вследствие нарушений местного кровообращения).

Посредством данного теста можно определить:

• степень риска образования тромбов у вышеперечисленных категорий пациентов;
• причины невынашивания и осложнения беременности;
• причины развития патологии органов на фоне появления в них тромбов.

Исследование уровня люпус-антикоагулянта применяется также для диагностики АФС (антифосфолипидного синдрома) – комплекса симптомов, среди которых рецидивирующие тромбозы сосудов или патология беременности при наличии в плазме антифосфолипидных антител. Диагноз считается подтвержденным при одновременном наличии клинического (подтвержденный сосудистый тромбоз или какой-либо вид патологии беременности в анамнезе) и лабораторного критерия, выявленного дважды в течение 12 недель. К лабораторным критериям относится:

• наличие антител к кардиолипину;
• положительный результат исследования на волчаночный антикоагулянт;
• выявление антител к бета-2-гликопротеину.

Наиболее часто риск тромбозов при АСФ обуславливается именно наличием волчаночного антикоагулянта.

Важно знать, что антикоагулянты типа варфарина, прямые ингибиторы тромбина и Ха фактора, а также избыточные дозы гепарина, применяемые во время проведения исследования, могут исказить полученный результат.

Показания к исследованию

Тестирование предназначено:

a) для определения у лиц моложе 50 лет причин:

• рецидивирующих тромбозов внутренних органов и конечностей;
• тромбоэмболий (острой закупорки сосуда тромбом, оторвавшимся от места своего образования);
• преходящего (динамического) нарушения мозгового кровообращения;

b) для обследования пациентов:

• с системной красной волчанкой;
• с необъяснимыми нарушениями свертывания крови;
• с умеренной тромбоцитопенией, сочетающейся с тромбозами;
• с ливедо (сетчатым рисунком на коже красновато-голубого или пурпурного цвета, образующегося вследствие нарушений местного кровообращения);

c) для определения причин необъяснимого удлинения активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ – времени формирования кровяного сгустка после добавления в пробу соответствующих реагентов) без выраженных проявлений кровоточивости;

d) для диагностики антифосфолипидного синдрома;

e) для диагностики причин невынашивания беременности в рамках комплексного обследования;

f) для опровержения ложноположительной реакции Вассермана (теста на сифилис).

Подготовка к исследованию

Забор крови производится утром строго натощак, не ранее чем через 8-14 часов после вечернего приема пищи. Разрешено пить только чистую воду без газа (не минеральную). От употребления чая, кофе, соков и прочих напитков необходимо воздержаться.

Общие рекомендации:

• перед проведением обследования необходимо исключить психоэмоциональные и физические нагрузки (в том числе посещение плавательных бассейнов, спортивных залов, сауны и т.п.);
• за сутки до забора крови запрещено употребление алкогольных напитков (в т. ч. пива);
• за час до исследования запрещается курение;
• перед обследованием не переедать и не злоупотреблять продуктами, содержащими большое количество жира;
• строго по согласованию с лечащим врачом перед сдачей крови на анализ рекомендуется прекратить прием лекарственных препаратов, которые могут исказить результат исследования;
• непосредственно перед отбором пробы желательно провести в спокойствии 10-15 минут.

ВАЖНО! На результат теста оказывает влияние прием антикоагулянтов (препаратов, замедляющих свертывание крови). Для получения достоверных данных рекомендуется воздержаться от прохождения обследования:

• при острых состояниях;
• после перенесенной операции;
• во время проведения лечения с применением антикоагулянтов.

Если есть острая необходимость в проведении обследования, необходимо обратиться к лечащему врачу для изменения тактики лечения, замены или отмены применяемых антикоагулянтов. Однозначно нецелесообразно проводить обследование при применении:

• препаратов-антагонистов витамина К (обследование проводится при международном нормализованном отношении (см. тест 605 ) ниже 1,5; в случае крайней необходимости с согласия врача можно перейти на низкомолекулярные гепарины (НМГ), оказывающие меньшее влияние на результаты данного исследования; в случае означенной замены кровь отбирается не ранее чем через 12 часов после последнего приема НМГ);
• препаратов нефракционного гепарина;
• прямых ингибиторов Х фактора.

Внимание! Кровь на анализ не отбирается после внутримышечных и внутривенных инъекций, физиотерапевтических процедур, массажа, переливания крови, флюорографии, кольпоскопии, гастроскопии, биопсии, рентгеновского, мануального, инструментального, ректального, ультразвукового исследования, электрокардиограммы, других терапевтических и/или диагностических манипуляций.

Интерпретация исследования

Тест по выявлению волчаночного коагулянта в лаборатории Медицинской компании «Наука» проводится с использованием специальных реагентов: высокочувствительного (ВА+) и низкочувствительного (ВА-) к волчаночному антикоагулянту и контрольного образца плазмы. Суть метода состоит в сравнении активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ) при добавлении к плазме больного и контрольному образцу плазмы поочередно двух вышеназванных реагентов и определении на их основе расчетного показателя, количественно отражающего вероятность наличия волчаночного антикоагулянта.

В результате применения реагентов определяется четыре показателя:

• t1 – время свертывания плазмы пациента с высокочувствительным реагентом (АЧТВ (ВА+));
• t2 – время свертывания контрольной плазмы с высокочувствительным реагентом (АЧТВ (ВА+));
• t3 – время свертывания плазмы пациента с низкочувствительным реагентом (АЧТВ (ВА-));
• t4 – время свертывания контрольной плазмы с низкочувствительным реагентом (АЧТВ (ВА-)).

При наличии в пробе волчаночного антикоагулянта наблюдается увеличение АЧТВ при использовании реагента (ВА+) относительно АЧТВ, получаемого при введении реагента (ВА-). Другие патологии, замедляющие свертывание крови, но не связанные с люпус-антикоагулянтом (например, дефицит факторов свертывания, наличие их ингибиторов, лечение непрямыми антикоагулянтами и гепарином, если его концентрация в плазме не выше 0,25 ед/мл), не дают при исследовании такого разрыва между показателями – АЧТВ при использовании высоко и низко активных реагентов приблизительно одинаковое.

На основании полученных данных рассчитываются показатели R1 = t1/t2 и R2=t3/t4, означающие:

• R1 – показатель увеличения времени свертывания плазмы пациента относительного контрольного образца с применением высокочувствительного реагента (АЧТВ (ВА+));
• R2 – показатель увеличения времени свертывания плазмы пациента относительного контрольного образца с применением низкочувствительного реагента (АЧТВ (ВА-)).

Итоговый показатель NR, количественно оценивающий гипокоагуляционный эффект люпус-коагулянта, рассчитывается как отношение R1 к R2:

NR = R1/R2

Полученное значение интерпретируется следующим образом:

• отрицательный результат – 0,79-1,19;
• сомнительный результат – 1,2-1,3;
• положительный результат – >1,3

Среднее значение NR для здорового человека или лица с патологиями системы свертывания крови, но при отсутствии волчаночного антикоагулянта равно приблизительно 0,99 с колебаниями в бо́льшую и меньшую стороны, не превышающими 0,2.

При получении сомнительного результата (NR = 1,2-1,3) необходимо пройти повторное тестирование через промежуток времени, который определит лечащий врач. Обследование желательно проходить в комплексе с другими исследованиями, позволяющими выявить люпус-антикоагулянт.

NR > 1,3 свидетельствует о высокой вероятности наличия в крови пациента волчаночного коагулянта.

Положительный результат может быть получен:

• при антифосфолипидном синдроме (АСФ);
• при тромбоэмболии (острой закупорке кровеносного сосуда тромбом, оторвавшимся от места своего образования)
• при венозных и артериальных тромбозах;
• при аутоиммунных заболеваниях (системной красной волчанке, ревматоидном артрите и пр.);
• при инфекционных заболеваниях (например, при поражении организма вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), вирусом Эпштейна-Бар (ВЭБ), парвовирусом В19, вирусными гепатитами; появление антител в этих случаях носит, как правило, временный характер);
• при развитии злокачественных опухолей;
• при множественной миеломе (злокачественной плазмоклеточной опухоли, синтезирующей моноклональные антитела, которые внедряются в прилежащую костную ткань и разрушают ее);
• при язвенном колите (хроническом аутоиммунном воспалительном заболевании слизистой оболочки толстой кишки);
• на фоне применения некоторых лекарственных средств (наблюдается редко);
• у незначительного процента (приблизительно у 2-4%) относительно здоровых людей.

Ложноположительный результат может быть получен:

• при использовании для лечения антикоагулянтов (гепарина или препаратов, его замещающих – гирудина, данапароида, аргатробана) или неспецифических ингибиторов;
• при несоблюдении правил подготовки к тестированию;
• при некорректном отборе материала.

Результат теста выдается на бланке лаборатории медицинской компании «Наука». Пример по данному анализу представлен ниже:

Ф.И.О.: Иванов Сидор Петрович  Пол: м     Дата рождения: хх.хх.хххх

Дата исследования: хх.хх.хххх

Литература:

1. Salmon, J., de Groot, P. Pathogenic role of antiphospholipid antibodies. — Lupus, 2008. — Vol. 17(5). — P. 405-411.

2. Клинические рекомендации по лечению антифосфолипидного синдрома. Ассоциация ревматологов России. М., 2013.

3. Клинические рекомендации по диагностике и лечению системной красной волчанки. Ассоциация ревматологов России, 2013. — 13 с.

Lim W. Thrombotic Risk in the Antiphospholipid Syndrome. Semin Thromb Hemost 2014; 40, pp.741–746.

4. Moore G.W. Recent Guidelines and Recommendations for Laboratory Detection of Lupus Anticoagulants. Semin Thromb Hemost. 2014; 40 (2), pp. 163-171.

5. CLSI H60-A Laboratory Testing for the Lupus Anticoagulant; Approved Guideline, 04/2014.

6. Negrini S. et al. The antiphospholipid syndrome: from pathophysiology to treatment. Clin Exp Med. 2017 17 (3), pp. 257-267.

7. Алексеева Е.И. с соавт. Системная красная волчанка: клинические рекомендации. Часть 1. 1. Вопросы современной педиатрии. 2018; 17 (1): 19–37.

8. Кобилянская В. А. Определение волчаночного антикоагулянта у пациентов на фоне приема ривароксабана. Вестник гематологии, 2018, 15, 1, с.47-48.

9. Flieder T. et al. Interference of DOACs in different DRVVT assays for diagnosis of lupus anticoagulants. Thrombosis Research, 2018, 165, 101–106.

10. Molhoek J.E. et al The Lupus Anticoagulant Paradox. Semin Thromb Hemost. 2018, 44 (5), pp. 445-452.

11. Bustamante, J., Goyal, A., Bansal, P. et al. Antiphospholipid Syndrome (Antiphospholipid Antibody Syndrome, APS, APLS), 2020. — Vol. 190. — P. 63-68.

12. Antiphospholipid Antibodies. — John Hopkins Lupuc Center, 2021.

13. Инструкция по применению набора реагентов для определения люпус-антикоагулянта.