Описание исследования
Influenza virus – это оболочечный вирус семейства Orthomixoviridae, который состоит из носителя информации (РНК) и оболочки (капсида).
Influenza virus (вирус гриппа) включает три типа вирусов, вызывающие у людей заболевание – A, B и C. Первые два типа становятся причинами сезонных эпидемий и пандемий (распространения заболевания в мировых масштабах).
Оболочка РНК вируса содержит сложные поверхностные белки – нейраминидазу (N) и гемагглютинин (Н), которые постоянно изменяются. В настоящее время выявлено 9 вариаций нейтраминидазы и 16 вариаций гемагглютинина. Субтип вируса определяется определенным сочетанием поверхностных белков. Возбудителями сезонных вспышек гриппа в подавляющем большинстве случаев являются субтипы H1N1 и H3N2 типа вируса гриппа А.
В целях пресечения распространения инфекции важно осуществлять идентификацию гриппа в самые короткие сроки. Быстрая диагностика важна еще и потому, что наиболее эффективное лечение противовирусными препаратами осуществляется в течение первых двух суток после заражения вирусом.
Для диагностики гриппа применяются различные лабораторные исследования. Прямые тесты направлены на выявление поверхностных белков капсида вируса. Именно они – нейраминидаза (N) и гемагглютинин (Н) являются определяющими факторами болезнетворности вируса. В связи с их изменчивостью возникают проблемы при идентификации гриппа прямыми тестами (например, методом прямой иммунофлюоресценции), чувствительность их достаточно низкая (не более 75%). В этом отношении применение метода полимеразной цепной реакции в режиме реального времени имеет значительное преимущество. Посредством данного метода можно выявить общую для разных видов вируса гриппа типов А и В консервативную последовательность РНК, что делает тест очень чувствительным (98-100%).
Второе несомненное преимущество ПЦР – быстрота проведения. Хотя грипп данным методом можно определить спустя более длительный срок, чем посредством других лабораторных методов, тем не менее, при исследовании отделяемого дыхательных путей он не должен превышать 4 суток (наиболее оптимальным является обор пробы в течение первых трех суток от момента инфицирования). Это обусловлено тем, что при поражении верхних дыхательных путей репликация (процесс размножения молекул РНК вируса) наиболее интенсивно происходит в течение первых 72 часов болезни. При поражении нижних отделов дыхательных путей вирусная нагрузка держится более продолжительный период времени.
При подозрении на поражение вирусом гриппа верхних дыхательных путей для обследования рекомендуется брать мазок из носа или ротоглотки. При симптомах поражения нижних отделов дыхательных путей, а также при отрицательном ответе тестирования отделяемого верхних или нижних дыхательных путей необходимо провести исследование мокроты. Наиболее точную диагностику гриппа обеспечивает сочетание метода ПЦР с общеклиническими исследованиями.
Подготовка к исследованию
Мазок из носа и ротоглотки
Нос
Оптимальным временем отбора пробы является утро, сразу после ночного сна. Перед проведением манипуляции необходимо освободить нос от слизи (если таковая имеется). Для выполнения процедуры применяется стерильный сухой зонд с ватными тампонами (вата не должна быть натуральной, тампон не должен быть помещен в транспортную среду). Возможен отбор пробы ворсинчатым зондом.
Перед отбором мазка из носа запрещено:
- за 3-4 часа промывать полость носа, пользоваться спреем или каплями;
- за неделю до проведения обследования применять закапываемую в нос вакцину для профилактики сезонного гриппа.
Ротоглотка
Соскоб с задней стенки глотки не проводится на фоне приема противобактериальных, противопаразитарных и противовирусных препаратов. Материал рекомендуется отбирать до проведения диагностики и локальной терапии в предполагаемом месте присутствия агента инфекции.
При обследовании с целью наблюдения за эффективностью терапии отбор пробы проводится через 10-14 дней после курса лечения средствами местного действия и не менее чем через 30 дней после внутривенного введения соответствующих препаратов.
Перед отбором соскоба в ротоглотке запрещается:
- применять аэрозольные средства и лекарственные препараты для рассасывания (минимальный срок выдержки – 6 часов);
- чистить зубы, жевать жвачку или пастилки, освежающие дыхание.
Непосредственно перед выполнением манипуляции необходимо прополоскать рот, используя для этого воду комнатной температуры.
Слюна
Обследование проводится перед началом лечения с применением противовирусных, противопаразитальных, антибактериальных средств.
Если исследование проводится с целью наблюдения за эффективностью терапии, отбор пробы проводится через 10-14 дней после курса лечения средствами местного действия и не менее чем через 30 дней после внутривенного введения соответствующих препаратов.
Перед отбором слюны:
- запрещается применение аэрозольных средств и лекарственных препаратов для рассасывания (минимальны срок выдержки – 6 часов);
- запрещается чистить зубы, жевать жвачку или пастилки, освежающие дыхание;
- рекомендуется трижды прополоскать рот, используя для этого воду кипяченую комнатной температуры или физиологический раствор.
Слюна отбирается в стерильный контейнер (взрослые) или пустую микропробирку емкостью 2 мл (дети). После сбора биоматериала контейнер (микропробирка) плотно закрывается крышкой во избежание вытекания слюны.
Отобрать пробу у ребенка можно с помощью стерильного 2-5-тимиллилитрового шприца без иглы. Слюна берется в защечном пространстве. Микропробирка заполняется не меньше, чем на половину объема (минимальная порция, необходимая для анализа – 1 мл).
Собранная слюна хранится в холодильнике при температуре не ниже +2 и не выше +8⁰С. Если нет возможности доставить ее немедленно после сбора, то срок хранения биоматериала не должен превышать 10-12 часов. Слюна доставляется на исследования в тот же день, в который была собрана.
Мокрота
Мокрота собирается в стерильный контейнер, который можно получить в пункте отбора биоматериала или самостоятельно купить в аптеке.
Обследование осуществляется строго до начала проведения антибактериальной терапии.
Накануне исследования (за 8-12 часов) рекомендуется употребить большой объем жидкости (питье должно быть теплым). Для облегчения откашливания следует принять отхаркивающие препараты.
Для стимулирования кашля разрешается надавить на корень языка.
Собранная мокрота замораживается, хранится и транспортируется только в таком состоянии.
Интерпретация исследования
Данный тест является качественным. Ответ выдается в формулировке «обнаружено» или «не обнаружено».
Нормой является отсутствие в исследуемой пробе специфических фрагментов РНК вируса гриппа.
Положительный результат свидетельствует об инфицировании Influenza virus.
Отсутствие в пробе фрагментов вирусного ДНК является показателем того, что инфекция (если имеет место ОРВИ) вызвана не Influenza virus.
Результат теста выдается на бланке лаборатории медицинской компании «Наука». Пример по данному анализу представлен ниже:
Ф.И.О.: Иванов Иван Иванович Пол: м Год рождения: 01.01.0000
Дата исследования: 12.12.0000
|
Исследование
|
Результат
|
Нормы интерпретации
|
Примечание
|
|
ПЦР
|
|
[50] вирусом гриппа Influenza virus A/B (РНК вирусов гриппа А/В)
|
Не обнаружено
|
Не обнаружено
|
|
