Описание исследования

Данный тест предназначен для иммунофенотипирования (оценки клеточного состава) лимфоцитов крови человека с целью определения его иммунного статуса – комплексного показателя работы иммунной системы. В качестве зондов используются моноклональные антитела, позволяющие охарактеризовать тип и функциональное состояние клеток по определенным наборам клеточных маркеров дифференциации (CD-антигенам).

Представители каждой субпопуляции лейкоцитов на разных стадиях содержат поверхностные и цитоплазматические антигены, характерные только для определенного вида и периода развития. Другими словами, CD-антигены – это антигены на поверхности клеток, по которым одни типы клеток отличаются от других. Существует стандартизация и дифференциация CD-антигенов, им присвоены определенные номера. Исследование проводится посредством метода проточной цитометрии. Он основан на выявлении фотометрических и флюоресцентных изменений отдельных клеток, проходящих вместе с жидкостью через луч монохоматического света. Метод позволяет с помощью флюоресцентно-меченых моноклональных антител посчитать количество лимфоцитов, относящихся к различным субтипам или находящихся на разных стадиях развития.

В рамках теста определяются следующие показатели:

• Лимфоциты, абс.;
• Т-лимфоциты (CD3+), %;
• Т-лимфоциты (CD3+) кл/мкл;
• Т-хелперы (CD3+CD4+), %;
• Т-хелперы (CD3+CD4+) кл/мкл;
• Т-цитотоксины (CD3+CD8+), %;
• Т-цитотоксины (CD3+CD8+) кл/мкл;
• Иммунорегуляторный индекс;
• B-лимфоциты (CD19+), %;
• B-лимфоциты (CD19+) кл/мкл;
• EKK (CD3-CD16+CD56+), %;
• EKK (CD3-CD16+CD56+) кл/мкл;
• T-EK (CD3+CD16+CD56+), %.

Характеристика основных подтипов лейкоцитов, исследуемых в тесте:

1. Т-лимфоциты. Созревание клеток происходит в тимусе (вилочковой железе – важном органе иммунной системы, расположенном в верхнем отделе грудной клетки), откуда и пошло их название. В их задачу входит контроль работы В-лимфоцитов, отвечающих за гуморальный ответ иммунной системы – продукцию антител.

Т-хелперы – подвид Т-лимфоцитов. Поверхность данных клеток содержит структуры, способные распознавать антигены, обнаруженные вспомогательными клетками. Также они принимают участие в регуляции иммунного ответа посредством продукции цитокинов (небольших информационных молекул).

Роль цитотоксических Т-клеток состоит в распознавании фрагментов антигена на поверхности клетки-мишени, направлении своих гранул по направлению к обнаруженной мишени и высвобождении их содержимого при непосредственном контакте с ней.

2. В-лимфоциты. Вырабатываются данные клетки в лимфоидной системе (лимфоузлах и периферических органах). Поверхность этих клеток содержит антитела-рецепторы к антигенам. При контакте с антигенами происходит деление В-лимфоцитов и дифференциация их в вырабатывающие антитела плазматические клетки, которые обеспечивают гуморальный иммунитет.

3. ЕКК. Естественные (или натуральные) клетки-киллеры проявляют неиммунную цитотоксическую активность к неопластически измененным (опухолевым) клеткам-мишеням. ЕКК не относятся ни к моноцитам, ни к зрелымВ- или Т-лимфоцитам.

4. Т-ЕК проявляют естественную неиммунную киллерную активность и проявляют признаки Т-лимфоцитов.

Подготовка к исследованию

Кровь сдается строго натощак после воздержания от пищи в течение:

• взрослые – 8-14 часов;
• дети в возрасте 1-5 лет – 2-3 часа;
• дети до года – 30-40 минут.

Можно пить негазированную воду. От употребления кофе, чая, соков следует воздержаться.

Общие рекомендации:

• накануне обследования рекомендуется воздерживаться от физических и эмоциональных перегрузок;
• за сутки до отбора пробы запрещено употребление алкогольных напитков, минимум за час – курение;
• за сутки перед проведением обследования при наличии возможности и с разрешения лечащего врача исключить прием любых лекарственных препаратов;
• непосредственно перед сдачей крови желательно 10-15 минут спокойно посидеть.

Забор крови не рекомендуется осуществлять после инструментального, ректального, мануального, рентгеновского, ультразвукового обследований, биопсии, кольпоскопии, гастроскопии, флюорографии, физиопроцедур, массажа, прочих диагностических и/или терапевтических манипуляций.

Показания к исследованию

Тестирование проводится:

а) при наличии затяжных, хронических, рецидивирующих инфекционных заболеваний:

• часто повторяющихся ОРВИ;
• хронических ЛОР-заболеваниях (отитах, гнойных синуситах, рецидивирующих воспалениях легких, бронхоплевропневмониях, периодических лимфаденитах);
• бактериальных кожных и подкожных инфекциях(фурункулезе, флегмонах, пиодермиях, септических гранулемах, абсцессах, рецидивирующих гнойных воспалениях прямой кишки (парапроктитах));
• инфекционных заболеваниях мочеполовой системы;
• поражении грибком кожи и слизистых оболочек;
• заражении паразитами;
• рецидивирующем герпесе;
• дисбактериозе;
• гастроэнтеропатии, сопровождаемой хроническим поносом неясной этиологии;
• присутствии длительное время без определенных причин субфебрильной температуры, лихорадки;
• генерализированных инфекциях (например, гнойных менингитах, сепсисе);

b) при подозрении на приобретенный или обусловленный генетически иммунодефицит;

c) при аутоиммунных заболеваниях (характеризуются атакой иммунной системой на здоровые клетки собственного организма, что приводит к поражению здоровых тканей и развитию аутоиммунных воспалительных процессов):

• рассеянном склерозе (образовании множественных рубцов на миелиновой оболочке нервных волокон головного и спинного мозга);
• ревматоидном артрите (поражении суставов);
• аутоиммунном тиреоидите (воспалении щитовидной железы);
• неспецифическом язвенном колите (рецидивирующем воспалительном заболевании толстой кишки);
• диффузных заболеваниях соединительной ткани (склеродермии, системной красной волчанке, дерматомиозите);

d) при аллергических заболеваниях:

• атопическом дерматите;
• нейродермите;
• экземе с присутствием инфекции;
• хроническом астматическом бронхите;
• тяжелой атопической бронхиальной астме;
• поллинозе (сезонной аллергической реакции на пыльцу);

e) при подозрении на СПИД;

f) при онкологических заболеваниях иммунной системы:

• болезни Ходжкина (раке лимфатических узлов);
• саркоме Капоши (многоочаговой сосудистой опухоли);
• лимфоме (раке, поражающем лимфатическую систему организма);
• остром и хроническом лимфолейкозе (болезни, характеризуемой прогрессирующим накоплением злокачественных В-лимфоцитов и поражающей на начальной стадии костный мозг, лимфоузлы, селезенку, периферическую кровь);

g) с целью обследования лиц перед и после трансплантации органов;

h) перед сложными операциями;

i) при осложнениях в послеоперационный период;

j) для осуществления контроля лечения, проводимого с применением цитостатиков (противоопухолевых препаратов), иммунодепрессантов (препаратов, искусственно угнетающих иммунную систему), иммуномодуляторов (препаратов, способных менять в любую сторону ответ иммунной системы организма).

Интерпретация исследования

Абсолютное количество клеток различных подтипов лимфоцитов измеряется в клетках в микролитре (кл/мкл), относительное – в процентах (%).

Иммунорегуляторный индекс – относительный показатель, рассчитываемый как соотношение CD4+ клеток (Т-хелперов) к CD8+ клеткам (Т-цитотоксическим клеткам).

Причиной изменения в составе субпопуляций лимфоцитов могут быть различные патологии, в частности, осложнения после оперативного вмешательства, трансплантации органов, при иммунодефиците, инфекциях, онкологических, аллергических, аутоиммунных заболеваниях. В таблице ниже отражены клинические ситуации, которые могут стать причиной изменения субпопуляционного состава лимфоцитов:

Субпопуляция лимфоцитов	Показатель повышается:	Показатель понижается:
T-лимфоциты (CD3+CD19-)	при острых и хронических инфекциях; при нарушении гормонального баланса; при продолжительном приеме лекарственных препаратов (особенно при терапии с применением одного лекарственного средства); при применении биологически активных добавок; при интенсивных спортивных нагрузках; при беременности; при Т-клеточных лейкозах;	при некоторых инфекционных заболеваниях; при иммунодефицитных состояниях; при алкогольном циррозе печени; при карциноме (раке) печени; при аутоиммунных заболеваниях; при применении иммуносупрессивных препаратов;
Т-хелперы (CD3+CD4+CD45+)	при некоторых аутоиммунных заболеваниях; при нарушении гормонального баланса; при некоторых инфекционных заболеваниях; при отдельных Т-клеточных лейкозах; при отравлении солями бериллия;	при иммунодефицитных состояниях (понижение уровня Т-хелперов является основным лабораторным признаком вторичного иммунодефицита); при алкогольном поражении печени; при аутоиммунных заболеваниях; при применении стероидов или иммуносупрессивных препаратов;
Т-цитотоксические лимфоциты (CD3+CD8+CD45+)	при некоторых вирусных инфекциях; при ряде Т-клеточных лейкозов; после наркоза; в острой фазе аллергии; при ряде аутоиммунных заболеваний;	при некоторых аутоиммунных и аллергических заболеваниях; при проведении иммуносупрессивной терапии;
В-лимфоциты (CD19+CD3-)	при ряде аутоиммунных заболеваний; при стрессе; при В-клеточных лимфомах; при длительной экспозиции формальдегидом;	при гипореактивности; при перераспределении В-лимфоцитов в очаги воспаления; при общем вариабельном иммунодефиците; при наследственном иммунодефиците; при введении внутривенно антител; при алкогольном циррозе печени;
Естественные киллеры (CD3-CD56+CD45+), (CD3-CD16+CD45+)	в стадии восстановления после вирусных инфекций (гепатита В, С); при ряде аутоиммунных патологий; при онкологических заболеваниях; при беременности; при алкогольном циррозе печени;	при некоторых инфекциях; при ряде аутоиммунных патологий; при интенсивном курении; при проведении иммуносупрессивной терапии и лечении стероидами;
Т-естественные киллеры (CD3+CD56+CD45+)	при длительных хронических воспалительных процессах; при тяжелом течении воспалительных процессов; при длительной персистенции антигена в организме.	Диагностического значения не имеет.

 

Результат теста выдается на бланке лаборатории медицинской компании «Наука». Пример по данному анализу представлен ниже (референсные значения указаны в графе «Нормы интерпретации»):

 

Ф.И.О.: Иванов Иван Иванович               Пол: м                        Дата рождения: хх.хх.хххх

Дата исследования: хх.хх.хххх

Исследование	Результат	Нормы интерпретации	Примечание
ИФА
[287] Фенотипирование лимфоцитов (основные субпопуляции) — CD3, CD4, CD8, CD19, CD16, CD56			Дата выдачи (дата исследования): хх.хх.хххх
Лимфоциты, абс.	3140	1320-3570 кл/мкл
Т-лимфоциты (CD3+), %	57,7	60,0-89,0 %
Т-лимфоциты (CD3+)	1812	880-2400 кл/мкл
Т-хелперы (CD3+CD4+), %	28,4	31,0-61,0 %
Т-хелперы (CD3+CD4+)	892	540-1460 кл/мкл
Т-цитотокс. (CD3+CD8+), %	26,8	14,0-36,0 %
Т-цитотокс. (CD3+CD8+)	842	210-1200 кл/мкл
Иммунорегуляторный индекс	1,06	1-3,5
B-лимфоциты (CD19+), %	12,6	5,0-19,0%
B-лимфоциты (CD19+)	396	100-480 кл/мкл
EKK (CD3-CD16+CD56+), %	29,7	4,0-26,0 %
EKK (CD3-CD16+CD56+)	933	78-470 кл/мкл
T-EK (CD3+CD16+CD56+), %	10,5	1,0-13,0 %

 

Результаты тестирования должен интерпретировать специалист-иммунолог. При постановке диагноза обязательно учитываются результаты клинических и лабораторных исследований, а также анамнез обследуемого лица.

Литература:

1. Клиническая лабораторная диагностика. Национальное руководство. Том 2./Ред. Долгов В.В., Меньшиков В.В./ – М., ГЭОТАР-Медиа, 2012 – 808 с.

2. Практическое руководство по детским болезням. Том 8 Иммунология детского возраста. /Ред. А.Ю.Щербина, Е.Д.Пашанов/ - Москва: МЕДПРАКТИКА, 2006 - 432 с.

3. Зурочка А.В., Хайдуков С.В. и др. - Проточная цитометрия в медицине и биологии. – Екатеринбург: РИО УрО РАН, 2013. – 552 с.

4. Клиническая иммунология и аллергология / Ред. Лолор-младший Г., Фишер Т, Д. Адельман Д../: Пер. с англ. - М.: Практика, 2000. - 806 с.

5. Ярилин А. А. Иммунология. – М.: ГЭОТАР-Медиа. 2010 - 752 с.

6. Ройт А., Бростофф Д., Дейл Д. Иммунология. - М.: Мир, 2000 — 592 с

7. Tietz Clinical guide to laboratory tests. 4-th ed. Ed. Wu A.N.B. – USA: W.B Sounders Company, 2006 - 1798 p.

8. Leach М., Drummond М., Doig A. Practical Flow Cytometry in Haematology Diagnosis Hardcover. – WILEY-BLACKWELL, 2013.