Описание исследования

Коронавирус SARS-CoV-2 (Severe acute respiratory syndrome-related coronavirus 2) относится к РНК-содержащим вирусам семейства Coronaviridae. Он является возбудителем синдрома COVID-19 – потенциально тяжелого острого респираторного заболевания, первоисточником которого по предварительным данным были подковоносые летучие мыши (у них отмечается наличие генетически близких к SARS-CoV-2 штаммов коронавирусов). Также предполагается, что промежуточными хозяевами могут быть другие животные. Однако на данный момент главным распространителем вируса является человек (уже заболевший или бессимптомный переносчик инфекции). Заболевание может передаваться несколькими путями:

• воздушно-капельным;
• воздушно-пылевым;
• контактным (через рукопожатие, непосредственный контакт, поверхности, предметы обихода, пищевые продукты, загрязненные вирусом).

Наиболее распространенными являются воздушно-капельный и контактный путь инфицирования. Заражение в этом случае может происходить при чихании, кашле, разговоре на расстоянии менее 1,5 метров.

Вариантов течения острой респираторно-вирусной инфекции COVID-19 несколько:

• бессимптомно (порядка 20% случаев);
• в легкой форме;
• в тяжелой форме.

Тяжелая форма достаточно часто осложнена двухсторонней пневмонией.

Инкубационный период заболевания составляет 2-14 суток (по данным наблюдения инфекция чаще всего проявляется через 5-7 дней).

Бессимптомными носителями вируса являются, как правило, дети и молодые люди.

В группу повышенного риска входят:

• новорожденные;
• беременные;
• курильщики;
• люди преклонного возраста;
• люди, страдающие хроническими болезнями.

Коронавирусная инфекция характеризуется наличием симптомов, типичных для большинства ОРВИ:

• высокой температурой и лихорадкой;
• сухим или с небольшим количеством мокроты кашлем с наличием боли в горле или без таковой;
• затрудненным дыханием, одышкой;
• ощущением заложенности в груди.

В некоторых случаях заболевание может сопровождаться насморком, головной болью, тошнотой, поносом, слабостью. Вследствие способности вируса влиять на клетки головного мозга, на ранних этапах заболевания у некоторых пациентов отмечается полное или частичное исчезновение обоняния и ощущения вкуса.

Патогенные (способность вызывать развитие болезни) и иммуногенные (вызывающие ответ иммунной системы) особенности коронавируса обусловлены его сложным строением. Вирусная частица включает в себя:

a) нуклеиновую кислоту (одноцепная РНК связана с нуклеокапсидным белком (N-протеином));

b) белковую оболочку (капсид), которая содержит белки-антигены:

• S-гликопротеин (он также называется S-белок, spike glycoprotein, шип);
• Е-белок (малый белок оболочки Е);
• М-белок (матричный белок М);
• НЕ (белок гемагглютинит-эстераза).

Своим названием коронавирус обязан входящим в состав наружной оболочки S-белков, имеющим форму шипов и придающим ему внешнее сходство с короной. Они играют главную роль в фиксации и проникновении вируса в средину клетки. Различают две субъединицы, составляющие S-белок – S1 и S2. S1 содержит RBD-домен (область шипа S-белка), который связывается с рецептором атакуемой вирусом клетки – мембранным белком ангиотензинпревращающий фермент II типа (АПФ2). Мембранный белок содержат оболочки клеток центральной нервной системы, дыхательных органов, сердца, почек, пищевода, мочевого пузыря, подвздошной кишки. Наибольшее количество рецепторов АПФ2 в реснитчатом эпителии дыхательных путей и альвеолах (пузырьках) легких. Субъединица S2 способствует слиянию вируса с клеточной мембраной и проникновению его в средину чувствительных клеток, где начинается активный процесс его размножения.

Однозначно определено, что иммуногенными свойствами обладают белки N (нуклеокапсидный) и S (спайковый). Защитные антитела, связывающиеся с областью RBD S1 спайкового белка COVID-19, способны препятствовать его связи с рецепторами клетки-мишени, тем самым нейтрализуя действие вируса. Это их свойство положено в основу действия большинства разрешенных к использованию и применяемых в настоящее время вакцин. Тест-системы, позволяющие выявлять антитела к вирусу, также разработаны с учетом этой особенности.

Реакция иммунной системы на контакт с вирусом проявляется выработкой 2 видов специфических иммуноглобулинов – IgM и IgG, способных распознавать и связывать агентов этой инфекции, нейтрализуя и удаляя вирус из организма. IgM являются ранними антителами. Обнаружить их можно на 7-14 дней с момента инфицирования, а при наличии признаков заболевания – не ранее, чем на 5 день от появления симптомов. Общая продолжительность периода, при котором вероятнее всего выявляются антитела класса М, составляет не более 60-90 дней. В этот период происходит постепенная замена их иммуноглобулинами IgG. Т. о. наличие антител IgM может являться показателем недавнего заражения инфекцией (ее острой фазы). Однако их обнаружение не является основанием для постановки диагноза.

Концентрация антител класса М и динамика специфического иммунного ответа у разных лиц может существенно отличаться. Так, у пациентов с угнетенной иммунной системой количество антител может быть неопределяемым. Не исключаются также случаи получения ложноположительных ответов, причиной которых могут быть перекрестные реакции или другие сывороточные интерференции.

Антитела класса IgG к рецептор-связывающему домену (RBD) S-белка SARS-CoV-2 образуются по одной из двух причин:

• инфицирование коронавирусом;
• введение вакцины.

Есть предположение, что именно антитела класса IgG обеспечивают гуморальный иммунитет. Количественное исследование данных антител проводится в следующих целях:

• в качестве дополнительного исследования к тесту ПЦР в рамках комплексной диагностики коронавируса;
• подтверждение факта заболевания в анамнезе;
• определение наличия возможного иммунитета к коронавирусу;
• отслеживание контактов;
• эпидемиологические исследования;
• определение ответа иммунной системы на введение вакцины, которая предназначена для формирования специфического иммунитета к спайковому белку SARS-CoV-2.

Оценка нейтрализующей активности антител осуществляется специальными методами, которые в рутинной лабораторной практике малодоступны. Вследствие этого определение количества антител класса IgG не относится к прямым методам определения нейтрализующих антител. Однако результаты данного теста показывают достаточно близкую взаимозависимость с показателями параллельно проводимых тестов нейтрализации.

Для получения более полной диагностической картины состояния гуморального иммунитета рекомендуется проводить исследования уровней антител IgG не только к спайковому белку, но и нуклеокапсидному (N).

Выработка антител к различным антигенам в динамике неоднородна. Инфицирование коронавирусом в большинстве случаев сопровождается продукцией антител к N-белку и S-белку SARS-CoV-2. При введении вакцины на основе S-белка, ответ иммунной системы может быть направлен только против него.

Наиболее информативную оценку реакции иммунной системы на вакцинацию можно получить при проведении поэтапного комплексного исследования с применением комбинаций тестов.

1 этап проводится непосредственно перед вакцинацией и включает в себя:

a) выявление текущей инфекции или ее ранней стадии посредством определения:

• РНК или антигена коронавируса;
• антител класса М к SARS-CoV-2;

b) выявление возможного инфицирования в прошлом и приобретения природного иммунитета, что предполагает:

• определение антител класса IgG к нуклеокапсидному белку (N-белку);
• количественное определение антител класса IgG к спайковому белку (S-белку).

2 этап комплексного исследования проводится через 1-3 месяца после первичной вакцинации перед проведением повторной вакцинации и предусматривает:

• количественное определение антител класса IgG к спайковому белку (S-белку).

3 этап проводится спустя 1-3 месяца после повторной вакцинации с целью определения количественного увеличения нейтрализующих антител:

• количественное определение антител класса IgG к спайковому белку (S-белку).

4 этап исследования проводится через год после ревакцинации с целью определения динамики изменения уровня антител за означенный период времени:

• количественное определение антител класса IgG к спайковому белку (S-белку).

Обратите внимание!

Анализы на COVID-19 сдаются строго по записи. Записаться можно:

• на сайте компании «Наука», перейдя по следующим ссылкам

Самара https://naykalab.ru/land3/covid.php;

Саратов https://naykalab.ru/land3/covid.php?region=saratov;

Пенза https://naykalab.ru/land3/covid.php?region=penza#pcr;

Оренбург https://naykalab.ru/land3/covid.php?region=oren;

Ульяновск https://naykalab.ru/land3/covid.php?region=ul;

Сызрань https://naykalab.ru/land3/covid.php?region=szr и заполнив форму внизу страницы;

• заказав обратный звонок;
• позвонив в любую лабораторию клиники «Наука» в вашем городе по указанным на сайте телефонам;
• через Call-центр по телефону +7 (846) 2-77-77-03 (04).

Подготовка к исследованию

Кровь на анализ рекомендуется сдавать утром не ранее чем через 8-14 часов после вечернего приема пищи. Разрешено пить только чистую воду без газа (не минеральную), употребление чая, кофе, соков запрещено.

Общие рекомендации:

• накануне и непосредственно перед сдачей крови воздержаться от физической и морально-психологической нагрузки;
• за сутки до обследования запрещено употребление алкоголя, за час – курение;
• за 24 часа до тестирования по согласованию с лечащим врачом рекомендуется прекратить прием любых лекарственных средств;
• непосредственно перед сдачей крови желательно 10-15 минут провести в спокойствии (посидеть).

Обратите внимание! Для получения корректного результата исследования кровь на анализ не рекомендуется сдавать после внутримышечных и внутривенных инъекций, физиотерапевтических процедур, массажа, переливания крови, флюорографии, кольпоскопии, гастроскопии, биопсии, пункции, рентгеновского, мануального, инструментального, ректального, ультразвукового исследования, электрокардиограммы, других терапевтических и/или диагностических манипуляций.

Важно! При проведении исследований в динамике сдачу крови рекомендуется осуществлять в одной и той же лаборатории, в одно и то же время суток, максимально соблюдая условия подготовки к тестированию (режим питания, физических нагрузок и т.д.)

Показания к исследованию

Тестирование проводится:

• в качестве вспомогательного исследования к ПЦР-тестам (поз 75, 75а в прейскуранте) и тестам на антитела IgG и IgM (поз. 297 и 298 соответственно) при диагностике COVID-19 и его осложнений;
• для дифференциальной диагностики инфекций с симптомами, схожими с коронавирусной COVID-19;
• с целью выявления факта перенесенного заболевания (в т. ч. и в бессимптомной форме) по наличию в крови иммуноглобулинов классаIgG к спайковому (S) белку коронавируса;
• для оценки гуморального иммунитета после введения вакцины от COVID-19;
• для оценки уровня специфического гуморального иммунитета IgG к SARS-CoV-2 в динамике.

Интерпретация исследования

Данный тест является количественным. В лаборатории Медицинской компании «Наука» уровень антител класса IgG к S-белку SARS-CoV-2 измеряется в BAU/мл (BAU - "binding antibody units" ("единицы связывающих антител")).

Нормы интерпретации:

• отрицательный ответ: <10 BAU/мл;
• положительный ответ: >10 BAU/мл.

Отрицательный результат свидетельствует об отсутствии или не определяемо низком уровне антител класса IgG к спайковому белку коронавируса и может наблюдаться:

• в случае отсутствия в прошлом инфицирования;
• на ранних стадиях заболевания (в инкубационный период – в течение первых недель от момента начала клинических проявлений);
• при снижении иммунологической реактивности – состоянии, характеризуемом замедлением или полной неспособностью выработки специфических антител у лиц с иммунодефицитом;
• при снижении количества антител до неопределяемого уровня спустя продолжительное время после перенесенного заболевания (у разных пациентов продолжительность присутствия антител индивидуальна, точно определенных сроков не установлено);
• при отсутствии в прошлом вакцинации от COVID-19;
• при неэффективности проведенной вакцинации от COVID-19 (антитела в диагностическом титре не выработались);
• в случае, когда после введения вакцины прошло недостаточно времени для продукции определяемого количества антител;
• при использовании для вакцинации от COVID-19 вакцины, не вызывающей продукцию антител к спайковому (S) белку SARS-CoV-2.

Положительный результат указывает на возможное присутствие нейтрализующих антител к S-белку коронавируса и может быть получен:

• при наличии иммунного ответа на недавнее или бывшее в прошлом инфицирование вирусом SARS-CoV-2;
• при получении иммунного ответа на введение вакцины, вызывающей выработку специфических нейтрализующих антител на спайковый белок SARS-CoV-2.

Предполагается, что наличие антител класса IgG должно предохранить от повторного заражения коронавирусом, однако доподлинно не известно, какой титр антител способен это гарантированно обеспечить.

При проведении теста возможно получение искаженного результата вследствие влияния интерферирующих факторов, что актуально:

• для пациентов, в ходе лечения или диагностики которых в прошлом применялись препараты на основе моноклональных антител (последствием этих манипуляций может быть присутствие в крови НАМА – человеческих антимышинных антител);
• для лиц, которые в силу профессиональной деятельности постоянно контактируют с животными, сыворотками животных, что может вызвать присутствие в крови гетерофильных антител;
• в случае присутствия в крови обследуемого лица ревматоидного фактора.

Результат теста выдается на бланке лаборатории медицинской компании «Наука». Пример по данному анализу представлен ниже:

Ф.И.О.: Петров Петр Петрович      Пол: м                        Год рождения: хх.хх.хххх

Дата исследования: хх.хх.хххх

Литература:

1. Диагностическое тестирование для определения вируса SARS-CoV-2. Временные рекомендации. 11 сентября 2020. ВОЗ.

2. Временные методические рекомендации. Профилактика, диагностика и лечение новой коронавирусной инфекции (COVID-19). Версия 10. 08.02.2021.

3. Lize M. Grobbelaar et al. SARS-CoV-2 spike protein S1 induces fibrin(ogen) resistant to fibrinolysis: Implications for microclot formation in COVID-19/ medRxiv, 2021.

4. Elizabeth M. Rhea et al. The S1 protein of SARS-CoV-2 crosses the blood-brain barrier in mice/ Nature Neuroscience, 2021, Vol. 24, pp. 368–378.

5. Andrey V. Letarov et al. Free SARSCoV2 Spike Protein S1 Particles May Play a Role in the Pathogenesis of COVID19 Infection/ Biochemistry (Moscow), 2021, Vol. 86, No. 3, pp. 257–261.

6. Bohn M.K. et al. IFCC Interim Guidelines on Serological Testing of Antibodies against SARS-CoV-2. Clin Chem Lab Med 2020; 58(12): 2001–2008.

7. Li X. et al Molecular immune pathogenesis and diagnosis of COVID-19. J Pharm Anal. 2020 Mar 5. doi: 10.1016/j.jpha.2020.03.001. Online ahead of print.

8. Lippi G. et al. Editorial and executive summary: IFCC Interim Guidelines on clinical laboratory testing during the COVID-19 pandemic. Clin Chem Lab Med 2020; aop.

9. Okba N.M.A. et al. SARS-CoV-2 specific antibody responses in COVID-19 patients. Emerg Infect Dis. 2020, vol 26, №7. Original Publication Date: 4/8/2020.

10. Walls A.C. et al. Structure, Function, and Antigenicity of the SARS-CoV-2 Spike Glycoprotein. Cell (2020).

11. Amanat F, Nguyen T, Chromikova V, et al. A serological assay to detect SARS-CoV-2 seroconversion in humans. medRxiv 2020: 2020.03.17.20037713.

12. Liu Y, Liu Y, Diao B, Ren Feifei, et al. Diagnostic indexes of a rapid IgG/IgM combined antibody test for SARS-CoV-2. medRxiv 2020; doi: 10.1101/2020.03.26.20044883.

13. Fei Xiang, Xiaorong Wang, Xinliang He, Zhenghong Peng, Bohan Yang, Jianchu Zhang, Qiong Zhou, Hong Ye, Yanling Ma, Hui Li, Xiaoshan Wei, Pengcheng Cai, Wan-Li Ma, Antibody Detection and Dynamic Characteristics in Patients with COVID-19, Clinical Infectious Diseases, ciaa 461.

14. Материалы фирмы-производителя реагентов.