Описание исследования

Резус (Rh) является одной из важнейших систем эритроцитарных антигенов, клинически значимой для определения степени риска развития резус-конфликта и гемолитической болезни плода новорожденного (данная болезнь обусловлена несовместимостью матери и плода по антигенам эритроцитов и очень часто является причиной желтухи и малокровия у новорожденных).

Из пяти антигенов системы резус наибольшую иммуногенность (способность вызывать ответ иммунной системы организма) проявляет антиген D, кодируемый геном RHD. Положительный резус-фактор (Rh+) характеризуется присутствием данного антигена на поверхности эритроцитов, отрицательный резус-фактор (Rh-) – его отсутствием. Соотношение лиц с положительным и отрицательным резус-фактором приблизительно составляет 86 к 14% соответственно.

Частым осложнением беременности женщины с отрицательным резус-фактором является развитие гемолитической болезни плода. Данное состояние обусловлено попаданием через плаценту в кровь матери эритроцитов вынашиваемого ребенка. Подавляющее число случаев ГБН (гемолитической болезни новорожденного) вызывается действием D-резус-антигеном. Его попадание в кровь матери становится причиной образования специфических антител, проникновение которых через плаценту в организм ребенка вызывает разрушение эритроцитов. Развитие резус-конфликта на раннем сроке беременности может стать причиной выкидыша, а в дальнейшем – преждевременных родов. С каждой следующей беременностью резус-положительным плодом повышенная чувствительность матери к D-антигену и вероятность развития резус-конфликта повышаются, причем это не зависит от того, чем завершилась предыдущая беременность – родами или прерыванием.

На сегодняшний день существует комплекс исследований, предназначенный для выявления резус-конфликта. В него входят:

• определение в крови матери количества специфических иммуноглобулинов к D-резус-антигену ребенка;
• получение инвазивными методами (т.е. посредством проникновения в утробу матери) образцов тканей хориона (оболочки плода, формирующейся на ранних стадиях развития ребенка) и плаценты;
• допплерография фето-плацентарного кровотока (определение скорости движения крови в аорте и средней мозговой артерии плода).

Инвазивные методы исследования в 2-3% случаев могут стать причиной самопроизвольного прерывания беременности, а отсутствие антител не является 100%-ным показателем резус-отрицательности плода. Дополнительная сложность ситуации состоит в возможности развития резус-конфликта на любом сроке беременности.

Кроме перечисленных, существует еще один метод диагностики – выявление ДНК плода в крови матери методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени. Преимуществами данного метода являются:

• отсутствие угрозы протекания беременности и развития осложнений, т.к. обследование неинвазивное;
• возможность ранней диагностики (начиная с 9-й недели беременности);
• точность (не ниже 96%) полученных результатов (она зависит от состояния плаценты, особенности протекания беременности и увеличивается пропорционально сроку беременности).

Кроме того исследование наличия ДНК ребенка в крови матери позволяет определить, насколько необходимо введение ей иммуноглобулина при отсутствии на сроке 20 недель анти-резусных антител.

Метод ПЦР имеет ограничение, т.к. у 1% женщин с отрицательным резусом может обнаруживаться ген RHD, причиной чему являются его различные мутации. Для таких пациенток исследование резус-фактора плода только методом ПЦР неприемлемо – необходимо также проведение серологических тестов. Резус-фактор считается отрицательным в том случае, если совпадают отрицательные результаты тестов.

ПЦР исследование не проводится, если у пациентки в прошлом были случаи трансплантации тканей и органов.

Аналитические показатели теста:

• выявляемые фрагменты ДНК: 7-й и 10-й экзоны (участки ДНК) гена RHD;
• специфичность теста: 90-100%;
• чувствительность исследования: 150 копий суммарной ДНК матери и ребенка, соответствующего 400 копиям RHD плода в 1 мл исследуемой плазмы крови.

Подготовка к исследованию

Забор крови рекомендуется проводить утром натощак или не ранее, чем через 4 часа после последнего приема пищи.

Общие рекомендации:

• накануне обследования желательно избегать физических и психоэмоциональных нагрузок;
• за сутки до отбора крови не употреблять спиртные напитки, за час – не курить;
• перед обследованием согласовать с лечащим врачом возможность отмены препаратов, которые могут повлиять на результат тестирования;
• кровь не отбирается после УЗИ, физиопроцедур и прочих манипуляций;
• непосредственно перед забором материала желательно 10-15 минут провести в спокойствии.

Забор крови не рекомендуется осуществлять после инструментального, ректального, мануального, рентгеновского, ультразвукового обследований, биопсии, кольпоскопии, гастроскопии, физиопроцедур, массажа, прочих диагностических и/или терапевтических манипуляций.

Показания к исследованию

Тестирование предназначено:

• для наблюдения за течением беременности у женщины с отрицательным резус-фактором с целью своевременного определения риска возникновения резус-конфликта;
• для определения вероятности развития резус-конфликта у женщин с отрицательным резусом при последующих беременностях в случае, если текущая была прервана путем хирургического вмешательства.

Тестирование проводится также в том случае, если есть необходимость введения беременной женщине с отрицательным резус-фактором иммуноглобулина к D-антигену плода с целью профилактики резус-конфликта.

Интерпретация исследования

Результат данного исследования может иметь следующие варианты:

1. Ген резус-фактора (RHD) плода не обнаружен. В этом случае принято считать, что резус-факто плода отрицательный, резус конфликт маловероятен (вероятность его не более 0,1%).

2. Ген резус-фактора (RHD) плода обнаружен. Интерпретация результата в этом случае формулируется так: резус-фактор положительный, резус конфликт возможен.

3. Ген резус-фактора (RHD) плода обнаружить невозможно. Данный результат интерпретируется так: ген (RHD) у матери обнаружен; данным методом невозможно выявить ген (RHD) плода. Не исключается вероятность развития резус-конфликта.

Применяемая для исследования тест-система включает опцию контроля взятия материала (КВМ). Если суммарное ДНК матери и ребенка ниже 0,1 нг в отобранной пробе, результат является недостоверным, а выдаваемый ответ содержит рекомендацию о повторном взятии пробы крови.

Результат теста выдается на бланке лаборатории медицинской компании «Наука». Пример по данному анализу представлен ниже:

Ф.И.О.: Петрова Инна Ивановна  Пол: ж                       Год рождения: хх.хх.хххх

Дата исследования: хх.хх.хххх

ВЫПИСКА

Резус-фактор плода (Ген RHD)

Чв 807 Иванова Пелагея Степановна

01.01.0000

Внимание. Данное исследование проводится только у серологически резус-отрицательной пациентки при сроке беременности более 8 недель.

Заключение:

Возможно развитие резус-конфликта.

Точность результата зависит от количества ДНК плода, обнаруживаемой в материнской плазме. Данная величина обусловлена состоянием плаценты и возрастает с увеличением срока беременности.

Определение резус-фактора методом ПЦР в режиме реального времени заключается в обнаружении гена RHD плода, кодирующего D-антиген, в крови матери.

Традиционный серологический метод основан на выявлении непосредственно D-антигена на эритроцитах крови.

Согласно литературным данным, в 99% исследований результаты, полученные серологическим методом и методом ПЦР, совпадают. Однако у 1% генотипически резус-положительных лиц серологическим методом может определяться отрицательный резус-фактор, что связано с мутациями в гене RHD и, как следствие, отсутствием или функциональной неполноценностью D-антигена. Поэтому после родов рекомендуется уточнить резус-фактор ребенка серологическим методом.

Литература:

1. Costa J.M., Giovangrandi Y., Ernault P., Lohmann L., Nataf V., El Halali N., Gautier E. Fetal RHD genotyping in maternal serum during the first trimester of pregnancy. British journal of haematology. 2002;119:255-260.

2. Finning K.M., Martin P.G., Soothill P.W., Avent N.D. Prediction of fetal D status from maternal plasma: introduction of a new noninvasive fetal RHD genotyping service. Transfusion. 2002;42:1079-1085.

3. Freeman K., Osipenko L., Clay D., Hyde J., Szczepura A. A Review of Evidence on Non-invasive Prenatal Diagnosis (NIPD): Tests for Fetal RHD Genotype. Workpackage 6, SAFE Network of Excellence Warwick Medical School, UK. 2006.

4. Wagner F.F., Frohmajer A., Flegel W.A. RHD positive haplotypes in D negative Europeans. BioMed Central genetics. 2001;15:10.

5. Минеева П.В. Группы крови человека. Основы иммуногематологии. – СПб. 2004:188.

6. Инструкция по применению набора реагентов для выявления гена RHD плода в крови матери методом ПЦР в режиме реального времени Резус-фактор плода ООО «ДНК-технология». Регистрационное удостоверение № ФСР 2017/5310.